Фармацевтическая химия

Идея метода заключается в том, что фермент фактор С, содержащийся в лизате амебоцитов мечехвостов Limulus polyphemus (ЛАЛ-реагент), реагирует практически только с БЭ, что запускает каскад ферментативных реакций, приводящий к активации свертывающего фермента, который в итоге превращает коагулоген в коагулин, что приводит к образованию геля.
Гель-тромб тест — полуколичественный вариант ЛАЛ-теста. Данный метод основан на образовании твердого геля после добавления к исследуемому образцу ЛАЛ-реактива. Предел обнаружения эндотоксина при таком методе составляет от 0,01 до 0,03 ЕЭ/мл.
Процедура метода заключается в следующем:
В круглодонные пробирки диаметром 10 мм вносят равные объемы испытуемого раствора и ЛАЛ-реактива (по 0,1 мл). Реакционные смеси аккуратно перемешивают и инкубируют при температуре 37 ± 1 °С в течение 60 ± 2 минут. Во время инкубирования следует избегать вибрации и ударов. По истечении указанного срока визуально регистрируют результаты как положительные или отрицательные. Положительная реакция (+) характеризуется образованием плотного геля, который не разрушается при аккуратном однократном переворачивании пробирки на 180°. Отрицательная реакция (–) характеризуется отсутствием такого геля или его мгновенному разрушению при переворачивании пробирки, что означает отсутствие бактериального эндотоксина на уровне предела чувствительности конкретного реактива.
Гель-тромб тест может быть выполнен в виде качественного анализа (метод А), устанавливающего соответствие образца заявленной норме предельного содержания БЭ, поэтому его часто называют «предельным» или «разрешающим/запрещающим». Концентрацию БЭ в испытуемых образцах можно определить методом В, например с помощью, двукратных разведений испытуемого образца.
Методы А и В являются наиболее доступными, для них не требуется считывающего прибора. Кроме того, выполнение гель-тромб теста возможно не только для истинных прозрачных и бесцветных растворов, но и для непрозрачных или окрашенных образцов, а так же для суспензий.
Несмотря на большие преимущества метода А и В, гель-тромб тест имеет следующие ограничения:
1) не автоматизированный тест, где учёт результатов проводят визуально и интерпретируют субъективно;
2) невозможно определить точное содержание БЭ;
3) наличие значительной погрешности (двукратная ошибка опыта);
4) метод требует существенных финансовых и трудовых затрат при определении большого числа образцов лекарственных средств (на производстве).